Извлечение эмбрионов

В настоящее время в мире почти повсеместно хирургический метод вымывания зародышей из яйцеводов и рогов матки вытеснен нехирургическим. Техника нехирургического извлечения эмбрионов (через цервикальный канал) с использованием 2- или- 3-х канального катете­ра Фоллея была предложена в середине 70-х годов Р. Елдсеном и Я. Хаслером.

Лучший срок для нехирургического извлечения эмбрионов — 7-8-е сутки (отсчет ведут от первого осеменения); в это время они находятся в передней и средней частях рогов матки, а сфинктер яйцепровода плотно закрыт.

Вымывание эмбрионов проводят в манеже, оборудованном фиксацион­ным станком. Подготовка включает фиксацию животного, обмывание за­грязненных мест и чистку кожного покрова, 12-часовую голодную диету и обследование яичников на наличие желтых тел. Извлечение эмбрионов про­водят при наличии в обоих яичниках не менее трех хорошо развитых желтых тел.

Для расслабления канала шейки матки и снятия напряжения прямой кишки делают низкую эпидуальную анастезию — вводят 5 мл 2%-ного рас­твора новокаина. Строптивым животным инъецируют миорелаксант (рампун или рометар).

Вымывание проводят при помощи резинового катетера Фоллея с при­способлением в виде надувного резинового баллона для фиксации его в роге матки. При подготовке к работе катетер Фоллея стерилизуют 96% спиртом-ректификатом, а внутрь вставляют стальной стилет.

Левую руку вводят в прямую кишку и освобождают ее от фекалий. Ка­тетер вместе со стилетом, заключенным в санитарный чехол, направляют в наружное отверстие-шейки матки и расчехляют.

Ладонью левой руки захватывают шейку матки и, поворачивая ее влево-вправо, натягивают на катетер, после чего катетер направляют в один из ро­гов матки. Как только верхушка катетера достигнет середины рога, дальней­шее его продвижение осуществляют по мере извлечение стилета. Убедив­шись в том, что конец катетера находится вблизи верхушки рога, а баллон впереди бифуркации, стилет полностью вынимают из катетера.

При помощи 20-граммового шприца баллон заполняют воздухом в объ­еме 10-15 см , что обеспечивает фиксацию катетера с одновременной изоля­цией промывочной полости, ограниченной передним участком рога матки.

Далее к катетеру подсоединяют специальный шприц объемом 50-60 мл, и медленно вводят в рог матки 40-50 мл фосфатного буфера Дюльбекко со­держащего 1% инактивированной сыворотки крови новорожденного теленка. Рог матки осторожно поглаживают, чтобы отделить эмбрионы от стенок мат­ки.

Промывную жидкость отсасывают шприцем и собирают в стерильный флакон. Вымывание повторяют 4-6 раз, расходуя 200-400 мл физиологической среды. При вымывании учитывают объем раствора, полученного из матки, так как с его уменьшением число вымытых эмбрионов снижается.

Потери раствора обычно связаны с недостаточной герметизацией про­мывной полости или нарушением целостности эндометрия (жидкость легко поглощается подслизистым слоем).

После окончания работы по вымыванию эмбрионов в одном роге, кате­тер переводят в другой рог и манипуляции повторяют. Процедура вымыва­ния эмбрионов обычно длится 20-50 мин. (Н.И. Полянцев, В.В. Подберезкин, 2001).

После завершения вымывания эмбрионов донору вводят через катетер Фоллея в рог матки растворенные антибиотики, например, гентамицин в дозе 500 мг, чтобы предупредить осложнения. Если планируется повторное ис­пользование коровы в качестве донора, то на 5-6-е сутки после вымывания зародышей ей инъецируют эсгрофан, что предотвращает развитие стельности и ускоряет возобновление очередного полового цикла.

Степень извлечения эмбрионов этим методом составляет 56-80%.

Поиск и оценка качества эмбрионов

Промывную жидкость отстаива­ют в термостате при 37°С в течение 30-40 мин. Затем верхний слой объемом 100 мл жидкости отсасывают. Нижний слой объемом 100 мм разливают в 2-3 пластмассовые чашки Петри с расчерченным на полосы или квадраты дном и ведут поиск эмбрионов под стереоскопическим микроскопом МБС-10 при 25-кратном увеличении. Обнаруженные эмбрионы забирают автоматической пипеткой и переносят в чашку Петри диаметром 40 мм или на часовое стекло с небольшим объемом физиологической среды.

Качество эмбрионов определяют по морфологическим показателям, функциональным пробам, в том числе с использованием витальных красите­лей, а также культивированием.

Биологически полноценными принято считать такие эмбрионы, которые имеют правильную шарообразную форму, гомогенную светлую цитоплазму, не поврежденную прозрачную зону, одинакового размера бластомеры с плотным межклеточным компонентом. Морфологическую оценку эмбрионов проводят на инвертированном микроскопе при увеличении 50-100 раз.

Различают четыре категории качества: отличное, хорошее, удовлетвори­тельное, плохое. Для пересадки используют эмбрионы отличного и хорошего качества. Вопрос о пригодности эмбрионов удовлетворительного качества решают после 12-24-часового культивирования при 37°С. Эмбрионы плохого качества бракуют.